Se nos explicò el fundamento teórico de la reacciòn de PCR y realizamos una.
El objetivo fue amplificar ADN correspondiente a dos genes diferentes: MageA4 y GAPDH.
La amplificaciòn se realizò a partir de dos muestras diferentes. La amplificaciòn de un fragmento de 1000 bases de MageA4 se realizò a partir de un vector con MageA4 clonado, mientras que la amplificaciòn del GAPDH se realizò a partir de una muestra de ARN mensajero retrotranscripto a ADN (ADNc).
Cada uno de nosotros realizò la PCR para amplificar MageA4 y GAPDH. Preparamos la mezcla de reacciòn de PCR con todos sus componentes (Buffer, MgCl2, dNTPs y Taq Polimerasa) y agragamos separadamente los primers especìficos para la amplificaciòn de MageA4 (A4) y GAPDH (G) y el ADN templado (muestra).
Los 4 tubos fueron puestos en la màquina termocicladora, donde se especificò la temperatura, duraciòn y tiempo de cada ciclo de amplificaciòn.
Una vez terminada la reacciòn de amplificaciòn (25 ciclos), se observò el resultado mediante una electroforesis en gel de agarosa conteniendo bromuro de etidio. La foto que se observa, muestra en la calle 1 y 2 los marcadores de peso molecular, en la calle 3 y 4 las reacciones de PCR realizadas por Leonel Stermann, en la calle 5 y 6 las reacciones realizadas por Yair Litman.
En la calles 7 y 8 marcadores de peso molecular, en la 9 y 10 PCR de control realizadas por personal del laboratorio y en las calles 11 y 12, el material de partida antes de amplificar.
El objetivo fue amplificar ADN correspondiente a dos genes diferentes: MageA4 y GAPDH.
La amplificaciòn se realizò a partir de dos muestras diferentes. La amplificaciòn de un fragmento de 1000 bases de MageA4 se realizò a partir de un vector con MageA4 clonado, mientras que la amplificaciòn del GAPDH se realizò a partir de una muestra de ARN mensajero retrotranscripto a ADN (ADNc).
Cada uno de nosotros realizò la PCR para amplificar MageA4 y GAPDH. Preparamos la mezcla de reacciòn de PCR con todos sus componentes (Buffer, MgCl2, dNTPs y Taq Polimerasa) y agragamos separadamente los primers especìficos para la amplificaciòn de MageA4 (A4) y GAPDH (G) y el ADN templado (muestra).
Los 4 tubos fueron puestos en la màquina termocicladora, donde se especificò la temperatura, duraciòn y tiempo de cada ciclo de amplificaciòn.
Una vez terminada la reacciòn de amplificaciòn (25 ciclos), se observò el resultado mediante una electroforesis en gel de agarosa conteniendo bromuro de etidio. La foto que se observa, muestra en la calle 1 y 2 los marcadores de peso molecular, en la calle 3 y 4 las reacciones de PCR realizadas por Leonel Stermann, en la calle 5 y 6 las reacciones realizadas por Yair Litman.
En la calles 7 y 8 marcadores de peso molecular, en la 9 y 10 PCR de control realizadas por personal del laboratorio y en las calles 11 y 12, el material de partida antes de amplificar.
