Dia 3

Este dìa se focalizò sobre la utilizaciòn de anticuerpos para detectar proteìnas. Esta explicaciòn se debe a que luego de expresar las proteìnas mediante la transfecciòn de vectores, es necesario poder detectralas ya sea en ensayos de western blot o inmunofluorescencia.
En general, la detecciòn de una proteìna se realiza mediante la utilizaciòn de un anticuerpo especìfico que reconoce a esa proteìna con alta afinidad. Este anticuerpo se llama anticuerpo primario. Una vez unido a la proteìna especìfica, el anticuerpo primario es reconocido por un anticuerpo secundario, que està conjugado a alguna senal detectable. En el caso del western blot, el anticuerpo secundario esta unido a una enzima peroxidasa que es detectada por una reacciòn de quimioluminiscencia. En el caso del la inmunofluorescencia, el anticuerpo secundario esta unido a una molecula fluorescente que permite visualizarlo en el microscopio de fluorescencia.

En este caso, se siguiò el procedimiento para realizar un westen blot. Se observò el armado de las cubas de electroforesis para geles de poliacrilamida, el cargado de la muestra, la corrida y la transferencia de las proteìnas corridas a membrana de nitrocelulosa.