Dia 7

Hoy hicimos purificaciones de vectores a partir de cultivo de bacterias.
Las bacterias E.Coli se utilizan en el laboratorio para amplificar en cantidad de los vectores que luego seran utilizados en distintos experimentos.
Pequenas cantidades de ADN de los vectores de interes se introducen en las bacterias por un metodo que se llama "transformacion de bacterias". Una vez incorporado el vector, la bacteria los replica muchas veces. Para su utilizacion en los experimentos, estos vectores deben ser purificados de las bacterias. Este es un procedimiento de rutina en los laboratorios de biologia molecular.
Realizamos los siguientes pasos. Tomamos las bacterias que habian crecido durante toda la noche a 37 grados en medio liquido y las pasamos a tubos pequennos tipo eppendorf. Las centrifugamos y nos quedamos con el fondo de bacterias. Luego agregamos una solucion para resuspenderlas y luego las lisamos con otra solucion que contiene NaOH y un detergente (SDS). Este medio alcalino fue neutralizado con un buffer acètico/acetato de sodio y centrifugamos. Todos los residuos de bacterias fueron al fondo del tubo, mientras que el ADN del vector quedo en solucion. Ese ADN del vector fue purificado por su afinidad por un soporte solido (Resina) como el silicato. Luego eluimos el ADN puro y lo cuantificamos mediante un gel de agarosa.